结核菌素试验（OT试验）是利用结核菌体蛋白来测定机体有无过敏反应，以确定是否受过结核菌感染，对诊断结核感染具有特异性，判断是否需要接种卡介苗或接种卡介苗是否成功。受过结核菌感染者，此试验呈阳性反应，但不表明有活动性结核病灶。未受感染或曾受感染但时间已久，反应消失者，试验呈阴性反应。一般婴幼儿大都未受过结核菌感染，多呈阴性反应。若呈阳性反应，则表示有活动性结核灶，应做进一步检查。在卡介苗预防接种前，应先做结核菌素试验，以确定接种对象。只有未感染过结核，结核菌素试验阴性者，方可接种卡介苗。凡结核菌素试验阳性者，表示已受过结核菌素感染，对结核菌具有免疫力，故不必再接种卡介苗。
一、试验液的配制
用旧结核菌素原液（每ml原液含10万结核菌素单位），以生理盐水稀释成1：100、1：1000、1：10000三种不同浓度的溶液分别装于密封消毒瓶内保存在冰箱中备用。在冰箱内放置6－8周仍有效。但在常温下保存不超过一周。试验液浓度由医生根据病情、年龄决定。稀释方法。
1．取旧结核菌素0.1ml加生理盐水至10ml，为1：100稀释液。
2．取1：100稀释液0.1ml加生理盐水至1ml，为1：1000稀释液。
3．取1：1000稀释液0.1ml加生理盐水至1ml，为1：10000稀释液。
4．眼科应用时，可按上法继续稀释至所需浓度。
二、试验方法
（一）原则 先从低浓度皮试液开始，若第一次试验结果为阴性，则可提高浓度再做第二次或第三次试验。
（二）方法 皮内注射0.1ml试验液。开始宜用1：10000或1：2000溶液（可疑结核者用1：10000溶液，以免反应过强），注射后分别于24、48、72小时观察反应一次（以72小时的结果为准）。如为阴性，则用高一级浓度再做试验，至1：100溶液为止。如均为阴性，方能确定为阴性。
三、试验结果判断（表11－2）
（一）阴性反应 局部无反应，或只红而无硬结。
（二）阳性反应
1．局部稍红肿，硬结直径小于0.5cm者，为可疑阳性。
2．局部红肿 硬结直径在0.5～2cm者，为阳性。
3．局部红肿 硬结直径在2cm以上，甚至发生水泡或坏死者，为强阳性。
4．局部出现强烈反应，有水泡或皮肤坏死时，可涂1％甲紫溶液，并用无菌纱布包扎，避免感染。淋巴管发炎时，可予以局部热敷。注射后有发热时，卧床休息，并进一步检查有无活动性结核病灶。
5．结核菌素试验可出现假阴性反应。如试验液失效或试验操作有误，以及以下情况使机体对结核的过敏性减弱或消失，均可造成假阴性反应。
（1）重症结核病，如粟粒性结核、结核性脑膜炎等。
（2）结核伴有某种传染时，如麻疹、 百日咳、猩红热、肝炎后1－2个月内。
（3）结核伴有其他长期慢性疾病与重度营养不良，以及结核患儿接种麻疹疫苗或牛痘短期内。
6．注意辨别假性反应。假阳性反应大都于36小时出现，其特点为局部明显发红，但硬结甚软且薄，边缘不整，36小时后逐渐消失。
表11－2试验结果判定标准
| 局部反应 | 判定 | 记录符号 |
| 微红，无硬结形成 | 阴性 | － |
| 红肿，硬结直径在0.5cm以下 | 可疑 | ± |
| 红肿，硬结直径在0.5～1cm以下 | 阳性 | ＋ |
| 红肿，硬结直径在1～2cm以下 | 阳性 | ＋＋ |
| 红肿，硬结直径在2cm以下 | 阳性 | 卅 |
| 红肿，局部有水泡、溃疡、坏死 | 阳性 |