首页\中医书籍\西医备考\《动脉粥样硬化》\
 《动脉粥样硬化》 > 第三章 载脂蛋白的种类与结构

第四节 载脂蛋白E

 

一、ApoE的蛋白结构

载脂蛋白E是一种富含精氨酸的碱性蛋白,人ApoE299个氨基酸残基组成,分子量为34145D,含32个Arg和12个Lys存在于血浆的CM、VLDL及其残粒和β-VLDL中均含有ApoE,一部分ApoE在血液中与ApoAⅡ形成复合体。

Shore于1973年首先发现ApoE,Rall等于1982年测出ApoE的蛋白质一级结构,其后Taylor建立ApoE的cDNA序列,Breslow 和Zannis首先测出ApoE有3个等位基因异构体以及基因在染色体上的定位。据推算和测定,在介质中ApoE有62%的α-螺旋,9%的β-片层,11%的β-转角和18%无规则线团。ApoE分子可以被凝血酶水解为二个区域,N-端区(1~191)为22kD的可溶性球蛋白,此区域较稳定,该片段的136~158位肽段为受体结合位点,富含碱性氨基酸(赖氨酸和精氨酸),也属于肝素结合区。此片段为一个反平行的四螺旋束,是α-螺旋蛋白的一般折叠方式。C端区(216~299)分子量为10kD,螺旋程度很高,不稳定,是与脂蛋白的结合区。用截去了末端的变异体及合成多肽片段进行ApoE羧基末端的检测表明,191残基以外羧基端存在三个螺旋,其中两个为A型(203~223和225~266),第三个(268~289)为一种G型螺旋。与脂类或不同的脂质微粒或二甲基磷脂酰胆碱结合的结果说明,G螺旋和第二螺旋的末端在脂质连结,在ApoE的四聚体化过程中起重要的作用。更精确地说是263~286片段可能在脂连结ApoE与VLDL的结合中起有关键作用。ApoE主要由肝脏合成,近年来发现脑,肾,骨骼,肾上腺及巨噬细胞也能合成。ApoE其结构如图3-2所示。

载脂蛋白E结构示意图

图3-2 载脂蛋白E结构示意图

 

二、ApoE的生理功能

ApoE生理功能有:①是LDL受体的配体,也是肝细胞CM残粒受体的配体,它与脂蛋白代谢有密切相关性;②ApoE具有多态性,多态性是决定个体血脂水平与动脉粥样硬化发生发展密切相关;③参与激活水解脂肪的酶类,参与免疫调节及神经组织的再生。

人类ApoE主要在肝脏和脑组织合成,在其他组织包括单核细胞(含巨噬细胞)也有合成能力。人的肾上腺、卵巢颗粒细胞也能合成ApoE。脑中ApoE的mRNA表达总量是肝脏的1/3,星形细胞是其主要合成部位。脑中生成的ApoE的作用可能是使细胞内的脂类重新分配而保持脑环境中的胆固醇平衡。脑肿瘤中发现有高浓度的ApoE,推断它可能作为神经胶质细胞瘤的标记。

 

三、ApoE多态性

Utermann等于1975年首先观察到ApoE多态性,利用等电聚焦电泳和SDS-PAGE可以确认ApoE的多态性,其后又被直接检测的cDNA序列所证实。ApoE有三种构体(isoform)即E2、E3和E4。有的人只含有一种主要异构体,即为纯合子;有人可含两种主要异构体,即为杂合子。由此可见,人群中可有六种不同的表型(phenotype)。

各种生物都能通过生殖产生子代,子代和亲代之间,无论在形态构造或生理机能的特点上都很相似,这种现象称为遗传(heredity),但是,亲代和子代之间,子代的各个体之间不会完全相同,总会有所差异,这种现象叫变异(variation)。遗传和变异是生命的特征。遗传和变异的现象是多样而复杂的,正因为如此,才导致生物界的多种多样性,生物体所具有的遗传性状称为表型或表现型(phenotype),生物所具有的特异基因成分称为基因型(genotype)。表型是基因型与环境因素相互作用的结果。遗传物质是相对稳定的,但又是可变的,遗传物质的变化以及由其所引起表型的改变,称为突变(mutation)。遗传物质的突变包括染色体畸变和基因突变。基因突变是染色体中某一点上发生化学改变,所以又称为点突变(point mutation)。基因结构和遗传表型的研究是深入了解脂蛋白代谢缺陷症的分子生物学基础,逆向遗传学方法(reversegenetic approach)则使其有可能在蛋白质水平系统地分析结构和功能的关系。现已采用一个特定的cDNA探针从基因库中筛选所需要的基因进行cDNA克隆,测定其核苷酸序列,然后从核苷酸序列推断蛋白质氨基酸序列。目前已分离出许多与动脉粥样硬化有关的脂蛋白的cDNA克隆,并将其蛋白质一级结构的氨基酸排列顺序和基因的核苷酸顺序测出。现已查明,ApoAⅠ,ApoⅣ,ApoE, ApoB, ApoCⅡ和Apo(a)都存在着异构体,也就是说存在着各种不同的表型或基因型,并可分别从蛋白质水平和核酸水平进行分型。

Zannis于1981年根据ApoE表型提出ApoE基因模型,认为ApoE的合成是由位于一个基因位点上的三个等位基因所控制,即E2、E3和E4,每一个等位基因对应于一个主要异构体产生三种纯合子(E2/2,E3/3,E4/4)和三种杂合子(E2/3,E2/4,E3/4)共六种常见表型,另外还有极少见的异构体。一般认为,次要异构体是由主要异构体翻译后,经唾液酸糖化修饰后转变而来。ApoE3/3型又称野生型。ApoE的氨基酸序列的112位和158位两种氨基酸残基即精氨酸(Arg)和半胱氨酸(Cys)的交换决定了异构体的种类。ApoE4在这两个位置上都是Arg;E2都是Cys;112位为Cys和158位是Arg者为ApoE3异构体,见图3-3所示,自然人群中,基因频率ε3分布最高,ApoE3/3表型分布约70%。

人ApoE三种主要异构体的氨基酸残基及基因密码的改变位置

图3-3 人ApoE三种主要异构体的氨基酸残基及基因密码的改变位置

由于ApoE多态性具有生物学重要性,对ApoE多态性的研究是目前医学的热门话题。ApoE表型和基因型的检测方法很多,多年来先后采用等电聚焦电泳和基因分析术进行检测。目前从基因水平研究ApoE基因型显然优于其蛋白表型,因为ApoE翻译后修饰会影响蛋白分析,常见ApoE的蛋白表型和基因型图谱如图3-4、图3-5所示。

等电聚焦检测的ApoE表型

图3-4 等电聚焦检测的ApoE表型

ApoE基因PCR产物HhaⅠ酶切后RFLP图谱

图3-5 ApoE基因PCR产物HhaⅠ酶切后RFLP图谱

M:PBr 322 DNA/Hhe Ⅲ Markers;1-5;分别为ε4/4、ε4/2、ε4/3和3/3;基因型6:PCR产物(292bp)

 

四、ApoE多态性与疾病

人群中ApoE多态性存在种族变异,不同人群中ApoE基因型高度不同。欧洲人ε4等位基因频率从北到南呈下降趋势的分布。亚洲人ε4频率低,相比之下,非洲人及巴布比亚和新几内亚ε4频率高。

由于早期观察到ApoE2/2表型的Ⅲ型高脂蛋白血症病人未在成年即患冠心病,从此,对ApoE多态性进行了广泛研究,许多证据认为,ApoE多态性是动脉粥样硬化早期及发展过程中个体差异的主要原因。大量人群调查发现ε4等位基因的一般作用是可以显着地升高健康人的总胆固醇浓度,使之易患动脉粥样硬化,相反,ε2等位基因的一般作用是降低胆固醇浓度,其降低效应是ε4升高胆固醇的2~3倍。ApoE等位基因变异还与血浆ApoB浓度、甘油三酯及血管收缩压有关。Menzel等认为ε2等位基因对冠状动脉硬化的发展有防护作用,经临床研究发现,患心血管疾病如心肌梗塞幸存者,或血管造影证明有动脉粥样硬化者,比其对照组的ε4等位基因频率高。ApoE4/3杂合子比E3/2和E3/3基因型者发生心肌梗塞年龄早。ApoE多态性变异还与肾病综合症、糖尿病有关。

值得重视的是ApoE多态性与老年性痴呆病(AD)的关系。1993年,Rose研究发现,晚发性家族型AD病人ε4频率增多,还发现ApoE和来源于淀粉样前体蛋白的小多肽Aβ的亲和力很高。其后陆续发现AD病人中携带ε4等位基因者占46.2%,而对照组占13.2%。还发现携带二个ε4等位基因的研究对象比携带一个ε4的研究对象发生AD年龄早,比不携带ε4等位基因的研究对象发生AD年龄更早,1994年,Schacher等人相继报道百岁老人普遍携带ε2基因。。这一发现使ApoE多态性和研究向前迈出了一大步。有报道高老年人携带ε2等位基因数量是年青人的2倍。因此ε2等位基因似乎不仅可以保护人们免患AD,而且还与长寿有关。ApoE多态性与AD的关系,目前的研究主要集中在脑代谢中与Aβ或Tau蛋白以及神经元生长和分枝等有关。

总之,在研究高脂血症评定心脑血管疾病的危险因素方面,以ApoE多态性为手段进行研究有重要的临床意义。有学者认为,基因型的“坏”(ε4)和“好”(ε2)的等位基因之间的平衡,可作为基因分析应用于医学检验领域,协助临床疾病的诊断。

 

缂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閹间礁纾归柣鎴eГ閸婂潡鏌ㄩ弴妤€浜惧銈庡亜缁绘濡甸幇鏉跨闁规儳鍘栭悽濠氭⒒娓氣偓濞佳囁囬锕€鐤炬繛鎴欏灪閸ゅ鎲搁悧鍫濈瑲闁绘挻鐟х槐鎾存媴闂堟稓浠奸梺鍝勵儑閸犳牠寮诲☉娆愬劅闁跨喓濮村浼存⒑閸濆嫮鐏遍柛鐘虫尵濡叉劙骞掑Δ鈧~鍛存煟濡櫣锛嶅ù婊勫姍濮婄粯鎷呴崨闈涚秺椤㈡牠宕卞☉妯碱唶闂佸綊妫跨欢銈囩礊閺嶃劎绡€闂傚牊渚楅崕鎰版煙椤栨粌浠﹂柕鍥у楠炲洭鍩℃担鎻掍壕婵°倐鍋撻柍缁樻閺佹捇鏁撻敓锟�

濠电姷鏁告慨鐑姐€傞挊澹╋綁宕ㄩ弶鎴狅紱闂佽宕樺▔娑氭閵堝憘鏃堟晲閸涱厽娈查梺绋款儏椤戝寮婚敐鍛傜喎鈻庨幆褎顔勯柡澶嗘櫆缁诲牆顫忛搹瑙勫磯闁靛ǹ鍎查悵銏ゆ⒑閻熸澘娈╅柟鍑ゆ嫹闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閻戣姤鍤勯柤鍝ユ暩娴犳碍淇婇悙顏勨偓鏍垂閻㈢ǹ绠犻柟鐗堟緲缁犳煡鏌曡箛瀣偓鏇犵不閿濆鐓ラ柡鍥殔娴滈箖姊洪挊澶婃殶闁哥姵鐗犲濠氬Ω閳哄倸浜為梺绋挎湰缁嬫垿顢旈敓锟�闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閻戣姤鍤勯柤鍝ユ暩娴犳氨绱撻崒娆掑厡缂侇噮鍨堕妴鍐川鐎涙ê浠奸梺缁樺灱婵倝宕戦妸褏纾奸悗锝庡亜椤曟粓鏌f惔顔煎⒋婵﹨娅i幑鍕Ω閵夛妇褰氶梻浣烘嚀閸ゆ牠骞忛敓锟�闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹妞嬪海鐭嗗〒姘e亾妤犵偞鐗犻、鏇㈡晝閳ь剛澹曢悷鎵虫斀闁绘ê鐤囨竟妯肩磼閻橀潧鈻堥柡宀€鍠栭獮鍡氼槾闁圭晫濮电换娑㈠川椤栨埃鏋呴梺鍝勮閸旀垿骞冮妶澶婄<婵炴垶锕╂导锟�濠电姷鏁告慨鐑藉极閹间礁纾婚柣鎰惈閸ㄥ倿鎮规潪鎵Э婵炴垯鍨圭粻锝夋煟閹邦厼顥嬬紒鐘冲哺濮婃椽骞栭悙鎻掑Ф闂佸憡鎸诲畝绋跨暦閺囥垹绠荤紓浣贯缚閸欏棝姊虹紒妯荤闁稿﹤婀遍埀顒佺啲閹凤拷濠电姷鏁告慨鐑藉极閹间礁纾婚柣鎰惈閸ㄥ倿鏌涢锝嗙缂佺姴缍婇弻宥夊传閸曨剙娅i梺娲诲幗椤ㄥ﹪寮诲鍫闂佸憡鎸婚惄顖炲春閳ь剚銇勯幒鎴濇灓婵炲吋鍔欓弻鐔哄枈閸楃偘鍠婂Δ鐘靛仜缁绘﹢寮幘缁樻櫢闁跨噦鎷�缂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閹间礁纾瑰瀣捣閻棗銆掑锝呬壕闁芥ɑ绻堥弻鐔风暋閻楀牊鎷遍梺鐟板暱閻倸顫忕紒妯诲闁告稑锕ラ崕鎾绘⒑濞茶骞栨い锔炬暬閻涱喛绠涘☉娆愭闂佽法鍣﹂幏锟�闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹瀹勬噴褰掑炊椤掆偓绾惧鏌熼幍顔碱暭闁稿鍊濋弻锟犲礃閵娧冾暫闂佹悶鍔岄崐鍧楀蓟閳╁啫绶為悗锝呭缁屽潡鎮峰⿰鍛暭閻㈩垱顨婂鏌ュ箹娴e湱鍙嗛梺缁樻礀閸婂湱鈧熬鎷�闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閻戣姤鍊块柨鏇炲€归崕鎴犳喐閻楀牆绗掔痪鎯х秺閺屸€愁吋鎼粹€崇闂侀€炲苯澧柛鐔告綑閻g兘宕¢悙鈺傜€婚梺褰掑亰閸撴瑩鐛幋锔解拻濞达綀濮ょ涵鍫曟煕閿濆繒鐣垫鐐茬箻閺佹捇鏁撻敓锟�闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹瀹勬噴褰掑炊椤掆偓绾惧鏌熼幍顔碱暭闁稿鍊濋弻锟犲礃閵娧冾暫闂佹悶鍔岄崐鍨潖濞差亶鏁嗛柍褜鍓涚划鏃堝箻椤旇棄鐝旈梺缁樻煥閸氬鎮¢妷鈺傜厽闁哄洨鍋涢埀顒€婀遍埀顒佺啲閹凤拷闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹妞嬪海鐭嗗〒姘e亾妤犵偞鐗犻、鏇㈡晝閳ь剛澹曡ぐ鎺撶厱婵犻潧瀚崝銈囩磼閳ь剚绻濋崒妤佹杸闂佺粯蓱瑜板啴鍩€椤掑倹鏆€殿喗鎮傚浠嬵敇閻斿搫寮抽梻浣虹帛濞叉牠宕愰崷顓涘亾濮樼偓瀚�闂傚倸鍊搁崐宄懊归崶褏鏆﹂柣銏⑶圭粣妤呮煙閹殿喖顣奸柛瀣剁節閺屾洘寰勯崼婵嗗濠电偞鍨惰彜闁衡偓娴犲鍊甸柨婵嗗暙婵$兘鏌涚€n偅宕岀€规洘甯¢幃娆戔偓娑櫳戦鐔兼⒒娴h姤纭堕柛锝忕畵楠炲繘鏁撻敓锟�缂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閹间礁纾瑰瀣捣閻棗銆掑锝呬壕闂佽鍨伴ˇ鐢稿箠閺嶎厼鐓涢柛灞捐壘缁ㄣ儲绻濋悽闈涒枅婵炰匠鍥ㄥ亱闊洦娲滈惌鍡椻攽閻樺弶澶勯柣鎾卞劦閺岋綁寮撮悙娴嬪亾閸︻厸鍋撳鐐闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹妞嬪海鐭嗗〒姘e亾妤犵偛顦甸弫鎾绘偐閼碱剦妲烽梻浣告惈濞层垽宕归崷顓犱笉闁绘ḿ绮悡娆撴煛婢跺﹦浠㈢紒銊ㄥ吹缁辨挸顓奸崱娆忊拰闂佸搫琚崝鎴﹀箖閵堝纾兼繛鎴烇供娴硷拷濠电姷鏁告慨鐑藉极閸涘﹥鍙忓ù鍏兼綑閸ㄥ倸鈹戦崒婧撳綊寮伴妷鈺傜厸鐎广儱楠搁獮妤呮煕鐎n亶鍎愮紒缁樼箖缁绘繈宕掑⿰鍐f嫪缂傚倸鍊哥粔鐢告偋閻樿钃熼柕濞炬櫆閸嬪棝鏌涚仦鍓р槈妞ゅ骏鎷�濠电姷鏁告慨鐑藉极閸涘﹥鍙忛柣鎴濐潟閳ь剙鍊圭粋鎺斺偓锝庝簽閸旓箑顪冮妶鍡楃瑨闁哥噥鍨堕幃鐢割敂閸″繐浜鹃柣鐔哄閸熺偟绱掔拠鎻掓殻濠碉紕鏁诲畷鐔碱敍閿濆棙娅囨俊鐐€栫敮濠勭矆娓氣偓椤㈡棃鏁撻敓锟�闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閻戣姤鍊块柨鏇炲€归崕鎴犳喐閻楀牆绗掗柛銊ュ€搁湁闁绘ǹ灏欓幊浣割熆閼搁潧濮囩紒鐘侯嚙闇夐柛蹇氬亹閹冲懐绱掔€n亞绠绘慨濠呮閹瑰嫰濡搁妷锔惧綒闂備胶鎳撻崵鏍箯閿燂拷闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹妞嬪海鐭嗗〒姘e亾妤犵偛顦甸弫鎾绘偐閸愯弓鐢婚梺鍝勵槸閻楀啴寮插┑鍫㈢焼濠电姴娲﹂悡鍐喐濠婂牆绀堥柣鏃傚帶閽冪喐绻涢幋鐑囦緵婵炵鍔戦弻娑㈩敃閵堝懏鐎诲銈呴獜閹凤拷闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹妞嬪海鐭嗗〒姘e亾妤犵偞顨呴オ浼村礋椤掆偓瀵潡姊洪崷顓℃闁哥喓鍠栧畷鍫曨敆娴e搫濮搁柣搴$畭閸庤京鎹㈤幒鏃傜煓闊洦绋掗埛鎴︽偣閹帒濡兼繛鍛姍閺岀喖宕欓妶鍡楊伓 濠电姷鏁告慨鐢割敊閺嶎厼绐楁俊銈傚亾闁伙絿鍏樺畷绋课旈埀顒勭嵁閵忊€茬箚闁靛牆鍊告禍楣冩⒑鐠団€崇仯闁稿鍊曢~蹇涙惞閸︻厾鐓撻柟鐓庣摠閹告悂骞冨澶嬧拺闁荤喐婢樺▓鈺呮煙閸戙倖瀚�闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閻戣姤鍊块柨鏇楀亾妞ゎ亜鍟撮獮鎰償閿濆孩閿ら梻浣瑰缁诲倿藝椤栨粌顥氬┑鐘崇閻撴瑩鏌℃径濠勪虎缂併劏宕电槐鎾愁吋閸℃瑥鈷岄梺鍝勮閸旀垿骞冮妶澶婄<婵炴垶锕╂导锟�闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹妞嬪海鐭嗗〒姘e亾鐎规洏鍎抽埀顒婄秵娴滃爼鎮㈤崱妯圭箚妞ゆ牗绮岀敮鑸点亜閵夛妇顣查柕鍥у楠炴瑩宕橀埡鍐崸缂傚倸鍊哥粔鐢告偋閻樿钃熼柕濞炬櫆閸嬪棝鏌涚仦鍓р槈妞ゅ骏鎷�闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閻戣姤鍤勯柤鍝ユ暩娴犳碍绻濆▓鍨灍闁挎洦鍋嗙划濠氬箣閿曗偓閻撴繈鏌¢崘銊у闁告娅曢妵鍕敃椤愩垺鐏撶紓浣割儏缁绘ê顫忛搹瑙勫磯闁靛ǹ鍎查悵銏ゆ⒑閻熸澘娈╅柟鍑ゆ嫹闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹瀹勬噴褰掑炊閵娧呭骄闂佸壊鍋掑鈧柣鎺戯攻缁绘盯宕卞Ο鍝勵潔闂佸憡鐟ョ换鎰亙闂佹寧绻傞幊搴ㄥ汲濞嗘垹妫柟顖嗗嫬浠撮梺鍝勮閸旀垿骞冮妶澶婄<婵炴垶锕╂导锟�婵犵數濮烽弫鍛婃叏閻戣棄鏋侀柟闂寸绾剧粯绻涢幋鏃€鍤嶉柛銉墻閺佸秹鏌i幇顓熺稇婵炲牞绲介—鍐Χ閸℃瑥顫х紓渚囧枛濞撮鍒掗崼銉ョ妞ゆ牗绋撻崣鍡涙⒑缂佹ɑ绀€闁稿﹤婀遍埀顒佺啲閹凤拷闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閻戣姤鍤勯柛顐f礀閸屻劎鎲稿澶樻晪闁挎繂顦粈鍫澝归敐鍥ㄥ殌閹兼潙锕铏瑰寲閺囩偛鈷夌紓浣割儐閸ㄨ绔熼弴銏犻敜婵°倓鑳堕崣鍡涙⒑缂佹ɑ绀€闁稿﹤婀遍埀顒佺啲閹凤拷闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閻戣姤鍤勯柛顐f礀閸屻劎鎲稿澶樻晪闁挎繂顦粈鍫澝归敐鍫燁仩闁绘挻鎹囧娲传閸曨厸鏋嗛梺鍛娗归崑鎰珶閺囩喓绡€婵﹩鍘鹃崣鍡涙⒑缂佹ɑ绀€闁稿﹤婀遍埀顒佺啲閹凤拷濠电姷鏁告慨鎾儉婢舵劕绾ч幖瀛樻尭娴滅偓淇婇妶鍕妽闁告瑥绻愰湁闁稿繐鍚嬬紞鎴犵磼閳ь剚寰勯幇顒傤啇闂佸湱鈷堥崢楣冨储濠婂懐纾界€广儱妫涙晶鐢告煛鐏炶濮傞柟顔哄€濆畷鎺戔槈濮楀棔绱�缂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閹间礁纾圭€瑰嫰鍋婂〒濠氭煙閻戞﹩娈曢柛銈呭閺屾盯顢曢敐鍡欘槬缂佺偓鍎抽…鐑藉蓟閿濆妫橀柟绋垮閸庢捇姊洪幖鐐插缂佽鐗撳濠氬Ω閳哄倸浜為梺绋挎湰缁嬫垿顢旈敓锟�闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹妞嬪海鐭嗗〒姘e亾妤犵偛顦甸弫宥夊礋椤撶姷鍘梻浣筋潐瀹曟﹢顢氳瀹曟帡濡歌閸犳劙鏌¢崘銊уⅱ鐎规挷绶氶弻娑㈠焺閸愵亖濮囬梺鍝勬噺閹倿寮婚妸鈺傚亞闁稿本绋戦锟�闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閻戣姤鍊块柨鏇楀亾妞ゎ亜鍟村畷绋课旀担闀愮暗闂備礁澹婇崑渚€宕曟潏鈺冪幓婵°倓鑳剁粻楣冩煙鐎涙ḿ鎳冮柣蹇婃櫇閻ヮ亪骞嗚閻撳ジ鏌$仦璇插闁诡喓鍊濆畷鎺戔槈濮楀棔绱�闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹瀹勬噴褰掑炊閵娧呭骄闂佸壊鍋掑鈧柣鎺戯攻閵囧嫯绠涢幘鎰佷槐闂佸搫顑嗛悧鐘诲蓟閿熺姴鐐婇柍杞拌閸嬫捇鏁愭径瀣珳婵犮垼娉涢鍡椻枍閵忋倖鈷戦悹鎭掑妼濞呮劙鏌熼崙銈嗗缂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閹间礁纾归柟闂寸绾惧湱绱掔€n偓绱╂繛宸簻鍥撮梺绯曟閺呮粓顢欓弮鍫熲拺鐟滅増甯楅敍鐔虹磼鐠佸湱绡€鐎殿噮鍋呯换婵嬪炊閵娧冨汲闂備胶绮ú鏍磹閸︻厸鍋撳鐐濠电姷鏁告慨鐑藉极閹间礁纾块柟瀵稿Т缁躲倝鏌﹀Ο渚&婵炲樊浜濋弲婊堟煟閹伴潧澧幖鏉戯躬濮婅櫣绮欓幐搴㈡嫳缂備礁顑嗛幑鍥Υ閸涘瓨鍊婚柤鎭掑劤閸欏棝姊虹紒妯荤闁稿﹤婀遍埀顒佺啲閹凤拷闂傚倸鍊峰ù鍥敋瑜嶉湁闁绘垼妫勭壕濠氭煥濠靛棭妲哥痪鎹愵潐缁绘盯骞嬮悙鍐╁哺瀵悂寮介妸褏顔曢梺鐟扮摠閻熴儵鎮炲ú顏呯厸濞达絽澹婇崕鏃堟煛鐏炶濮傞柟顔哄€濆畷鎺戔槈濮楀棔绱�闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閹间降鍋戦柟缁㈠枛绾惧鏌涢弴銊モ偓瀣洪鍕幯冾熆鐠虹尨鍔熼柡灞界墦濮婅櫣鎲撮崟顐㈠Ц濠碘槅鍋勭€氼喚鍒掗崼銉ラ唶闁靛濡囬崣鍡涙⒑缂佹ɑ绀€闁稿﹤婀遍埀顒佺啲閹凤拷
闂傚倸鍊搁崐椋庣矆娓氣偓楠炴牠顢曚綅閸ヮ剦鏁冮柨鏇楀亾闁汇倗鍋撶换婵囩節閸屾粌顣洪梺钘夊暟閸犳牠寮婚弴鐔虹闁割煈鍠栨竟鍕攽閻愬弶鈻曞ù婊勭矒瀹曟﹢鍩€椤掑嫭鈷戦梻鍫熺▓鎼撮绱掗懠璺轰汗闁奸缚椴哥换婵嗩潩椤撴稒瀚奸梻浣告啞閹告槒銇愰崘鈺冾洸婵犻潧娲ㄧ粻楣冩煕濞嗗浚妲哄褏鏁搁埀顒冾潐濞叉ḿ鎹㈤崼銉ユ瀬闁瑰墽绮弲鎼佹煥閻曞倹瀚�