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 《中国幽门螺杆菌研究》 > 1.2基础实验研究

抗幽门螺杆菌抗体检测标准系统的应用

由于幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)人群感染率高,在正常人群中往往也存在一定的抗Hp抗体滴度,在抗体测定中因选择的阴性参考血清不同,各检验单位间的资料没有可比性,同时也不利于病人抗Hp治疗后对其抗体滴度变化的观察。本实验在大量人群资料和实验室资料的基础上,确定了抗Hp尿素酶抗体检测中的阳性判断界值,建立了此抗体检测标准系统,完成了标准阳性血清中特异性抗Hp尿素酶抗体的定量工作。

1 材料和方法

1.1 材料

抗Hp抗体阳性及阴性血清各50份,经实验室酶联免疫吸附实验(ELISA)和免疫印迹分析(Western blots)证实。10736份其它血清采自北京和河南的四个人群现场。Hp尿素酶抗原(HpU)由本实验室分离纯化。酶标板采用美国Linbro/Titertek酶标板。IgG标准品购自百泰生物技术公司,为日本北里研究所产品,IgG含量为15.5g/L。参考血清由多份抗Hp抗体阳笥血清混合而成。

1.2 方法

①用6μgHpU/孔包被酶标板。用常规ELISA方法测定各血血中的抗Hp抗体,用Linbro/Titertek酶标仪读取各孔吸光度(A)[旧称光密度(OD)下同],用参考血清作板间校正后,用Foxpo及EPI软件对结果进行分析处理,确定血清抗Hp菌IgG抗体检测结果与临床Hp感染的高符后率判断界值。②用100~0.001μgIgG标准品/孔不同浓度包被酶标板(每种浓度包被3孔),用ILISA方法测定IgG标准品的结合量,观察IgG标准品可全部结合时的适宜包被浓度用IgG标准品被量与吸光度(A)间存在线性关系的范围。③用过量抗原(300μgHpU/孔)包被酶标板,将能考血清按1:20~1280倍比稀释后,用常规ELISA方法测定各稀释血清中的抗HpU抗体(每滴度测定6孔),用Linbro/Titertek酶标仪读取各孔吸光度(A),绘制不同滴度与吸光度(A)间存在线性关系的范围内,采用三点计算参考血清中抗HpU特异性抗体的含量,并按其均值推算标准阳性血清中特异性抗HpU抗体的含量。

2 结果

统计结果显示,用参考血清及吸光度(A)的0.77倍[即将参考血清稀释3.74倍时的吸光度(A)]作为判断待测血清的阳性标准时,达到最高的检测符合率,此时对100份抗幽门螺杆菌抗体阳性及阴性血清的检测符合率为100%。

IgG标准品可全部结合时的适宜包被浓度为≤0.2μgIgG标准品/孔,IgG标准品包被量与吸光度(A)间存在线性关系的范围为包被浓度为0.2~0.01μgIgG标准品/孔。

在IgG标准品包被量与吸光度(A)间存在线性关径流的范围内,采用三点进行参考血清HpU特异性抗体的含量测定结果分别为239、248和248μg /ml,平均245μg/ml。依此计算得出标准阳性血清中特异性抗HpU抗体的含量为66μg/ml。

3 讨论

本实验在大量人群资料和实验资料的基础上,建立了抗体幽门螺杆菌血清抗体诊断标准,并在国内抗幽门螺杆菌素酶抗体检测中首次采用判断界值技术,完成了标准阳性血清中特异性抗幽门螺杆菌尿素酶抗体的定量工作,不但使检验过程更加稳定,使各检验单位的资料具有可比性,也使基层单位应用目测判断结果也能达到检验要求。此标准系统用于慢性胃炎和消化性溃疡的协助诊断及流行病学调查,在北京天坛医院、友谊医院、北京肿瘤研究所、首都儿科研究所及广东、江西、河北、内蒙、河南等地的应用取得了良好的效果。